El Director General de la Organización Mundial de la Salud (OMS) declaró el brote global creciente de viruela del simio una Emergencia de Salud Pública de Preocupación Internacional (PHEIC, por sus siglas en inglés) el pasado 23 de julio de 2022. Según la OMS, hay más de 35,000 casos en 92 países/territorios, y 12 muertes al 17 de agosto. La mayoría de los casos informados (con antecedentes de viaje) viajaron a áreas de Europa y América del Norte, es importante para quienes trabajan en la investigación saber las Directrices de laboratorio para la detección de la Viruela del mono.
La viruela del mono es una enfermedad rara causada por la infección con el virus de la viruela del mono (MPVX), un virus de ADN de doble cadena envuelto que pertenece a la misma familia de virus que causan la viruela. Este virus puede transmitirse a través del contacto con fluidos corporales, lesiones en la piel o superficies mucosas internas con síntomas como fiebre, dolor de cabeza y dolores musculares. El período de incubación de la viruela del simio suele ser de 6 a 13 días, pero puede oscilar entre 5 y 21 días (alrededor de tres semanas).
Modos de transmisión y síntomas del virus de la viruela del mono
Según la OMS, las mejores muestras de diagnóstico se obtienen directamente de la erupción: piel, líquido o costras, o biopsia cuando sea viable. Otros métodos, como la detección de antígenos y anticuerpos, pueden no ser útiles, ya que no distinguen entre los ortopoxvirus.
Se recomienda un enfoque basado en el riesgo al manipular las muestras de los casos sospechosos, probables o confirmados de viruela símica en el laboratorio. Por lo tanto, los procedimientos para detectar la presencia del MPXV, que se clasifica como un patógeno del grupo de riesgo 3, deben realizarse en un laboratorio de Bioseguridad Nivel 2 utilizando la lista de equipos que se muestra a continuación.
Guía del equipo para la detección del virus de la viruela del mono
1.- Almacenamiento de muestras y reactivosSe recomienda refrigerar las muestras MPXV entre 2 °C y 8 °C o deben congelarse (-20 °C o menos) dentro de la hora posterior a la recolección. Si el tiempo de transporte supera los siete días, las muestras deben almacenarse a -20 °C o menos. Mientras tanto, se recomienda -70 °C para el almacenamiento de muestras a largo plazo (>60 días desde la recolección).Los refrigeradores de laboratorio, los congeladores de laboratorio y los congeladores de temperatura ultrabaja están equipados con sistemas de refrigeración bien diseñados y materiales de alta calidad adecuados para el almacenamiento de muestras biológicas sensibles a la temperatura que requieren condiciones de almacenamiento críticas.
Lexicon® II Ultracongelador
Controlador plata con 3 puertas interiores
Lexicon® II Ultracongelador
Controlador plata con 5 puertas interiores
Lexicon® II Ultracongelador
Controlador oro con 3 puertas interiores
Lexicon® II Ultracongelador
Controlador oro con 5 puertas interiores
2.- Manipulación y preparación de muestras
El MPXV puede transmitirse durante la etapa de procesamiento de muestras debido a material contaminado o métodos inadecuados. Como resultado, se deben observar mayores medidas de bioseguridad. Antes de la inactivación de la muestra, las muestras de pacientes con sospecha de MPXV deben prepararse en una cabina de bioseguridad de clase funcional II; sin embargo, esto no es necesario para especímenes debidamente inactivados.
Además de la protección que brindan las cabinas de bioseguridad, las cabinas de seguridad biológica Esco Clase II cumplen con NSF 49 y EN 12469 con características fáciles de usar y están recubiertas con polvo antimicrobiano en todas sus superficies pintadas externas e internas para mejorar la seguridad. Las centrífugas son necesarias para la separación de los componentes líquidos y sólidos de la muestra. Se recomiendan copas de seguridad o rotores sellados si son esenciales para el procedimiento.
Los agitadores de microplacas garantizan una incubación precisa de las reacciones y la desnaturalización de los ácidos nucleicos y las proteínas. Es muy recomendable el agitador/incubador de microplacas Esco Provocell™ está diseñado para cambiar rápidamente entre calentamiento y enfriamiento con un control de temperatura preciso y uniformidad de bloques.
3.- Detección y Análisis
Se realizan pruebas de amplificación de ácido nucleico (NAAT) para confirmar la infección por MPXV. Para detectar secuencias únicas de ADN viral, se utiliza la PCR en tiempo real o la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) convencional. Hay dos pasos involucrados en la detección de virus. La primera PCR detecta ortopoxvirus pero no identifica la especie, mientras que la segunda PCR (o secuenciación) detecta específicamente MPXV.
Un termociclador de PCR en tiempo real proporciona una amplificación eficiente de los ácidos nucleicos para el análisis de virus. Esco Lifesciences ofrece los nuevos termocicladores de PCR Swift™ con una computadora integrada para operación independiente desde la entrada, el monitoreo y el análisis del programa de PCR.
Los gabinetes de PCR proporcionan un entorno estéril para la preparación de muestras y reactivos durante la preparación de la mezcla maestra de PCR. Los gabinetes de PCR (PCR ) Airstream® de Esco están equipados con flujo laminar filtrado por HEPA, monitoreo de flujo de aire, lámpara UV y alarma de cambio de prefiltro para proporcionar un ambiente estéril para la preparación de la mezcla maestra de PCR.
Recordatorios de seguridad
El personal del laboratorio debe usar equipo de protección personal (EPP) completo cuando manipule muestras sospechosas de viruela del simio.
Los desechos provenientes de los cultivos, las reservas y las muestras residuales deben descontaminarse antes de eliminarlos mediante un autoclave.
Se recomienda que el procesamiento y análisis del material de la lesión de viruela símica se realice en una instalación con personal de laboratorio vacunado.
Siga las pautas aprobadas establecidas por la Organización Mundial de la Salud y los Centros para el Control y la Prevención de Enfermedades.
Descontamine las superficies de trabajo antes y después de los procedimientos de prueba con un desinfectante de grado hospitalario registrado por la EPA.